超聲波細胞破碎儀廠家介紹常見的細胞破碎的方法有:
(一)物理破碎法,指利用溫度差、壓力差或超聲波等將細胞破碎開來。
1.用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂(借助超聲的震動力破碎細胞壁和細胞器)。
機制:可能與強聲波作用溶液時,氣泡產(chǎn)生、長大和破碎的空化現(xiàn)象有關(guān),空化現(xiàn)象引起的沖擊波和剪刀力使細胞裂解。
超聲波細胞破碎儀的效率取決于聲頻、聲能、處理時間、細胞濃度和細胞類型等。
2.高壓破碎:細胞懸浮液從高壓室的環(huán)狀隙噴射到靜止的撞擊環(huán)上,被迫改變方向經(jīng)出口管流出。此過程中細胞經(jīng)歷了高速造成的剪切的碰撞及高壓到常壓的變化,從而破碎釋放內(nèi)含物。
這是一種溫和的、*破碎細胞的較理想的方法。
3.反復(fù)凍融法:將細胞在-20度以下冰凍,室溫融解,反復(fù)幾次,由于細胞內(nèi)冰粒形成和剩余細胞液的鹽濃度增高引起溶脹,使細胞結(jié)構(gòu)破碎。
(二)化學(xué)破碎法,指利用甲醛、丙酮等有機溶劑或表面活性劑作用于細胞膜,使細胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞或透性發(fā)生改變 。
有些動物細胞,例如腫瘤細胞可采用十二烷基磺酸鈉(SDS)、去氧膽酸鈉等細胞膜破壞。濃度一般為1mg/ml。
(三)機械破碎法,是指利用搗碎機、研磨器或勻漿器 等將細胞破碎開來。
1. 高速組織搗碎:將材料配成稀糊狀液,放置于筒內(nèi)約1/3體積,蓋緊筒蓋,將調(diào)速器先撥至zui慢處,開動開關(guān)后,逐步加速至所需速度。此法適用于動物內(nèi)臟組織、植物肉質(zhì)種子等。
2. 玻璃勻漿器勻漿:先將剪碎的組織置于管中,再套入研桿來回研磨,上下移動,即可將細胞研碎,此法細胞破碎程度比高速組織搗碎機為高,適用于量少和動物臟器組織。
(四)酶學(xué)破碎法,選用合適的酶,使細胞壁遭到破壞,進而在低滲溶液中將原生質(zhì)體破碎開來。
細菌細胞壁較厚,可采用溶菌酶處理效果更好。
裂解液標準配方:50mM Tris-HCl(pH8.5~9.0), 2mM EDTA, 100mM NaCl, 0.5% Triton X-100, 1mg/ml溶菌酶。(溶菌酶在這個pH范圍內(nèi)比較好發(fā)揮作用) 。
無論用哪一種方法破碎組織細胞,都會使細胞內(nèi)蛋白質(zhì)或核酸水解酶釋放到溶液中,使大分子生物降解,導(dǎo)致天然物質(zhì)量的減少,加入二異丙基氟磷酸(DFP)可以抑制或減慢自溶作用;加入碘乙酸可以抑制那些活性中心需要有疏基的蛋白水解酶的活性,加入苯甲磺酰氟化物(PMSF)也能清除蛋白水解酶活力,但不是全部,而且應(yīng)該在破碎的同時多加幾次。
以上是細胞破碎的常見方法,更多相關(guān)問題,咨詢超聲波細胞破碎儀廠家。